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    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目录号 : TW33561
    • 应用 : 仅供科研使用
    • 保存条件 : 低温保存
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人肺小动脉内皮细胞
产品简介
产品名称 : 人肺小动脉内皮细胞
产品品牌 : 通蔚生物
组织来源 : 肺小动脉组织
产品规格 : 5×105cells/T 25细胞培养瓶

细胞简介
人肺小动脉内皮细胞分离自肺小动脉组织;肺动脉干是短而粗的动脉,自右心室的动脉圆锥起始,向左后上方斜升,先在升主动脉根部的前面,继而至其左侧,至主动脉弓的下方,约在第5胸椎高度,分为左、右肺动脉。左肺动脉较短,横行向左,经左主支气管前方至左肺门,分两支进入左肺的上、下叶。右肺动脉较长,横行向右,经主动脉升部和上腔静脉的后方达右肺门,分3支进入右肺上、中、下叶。左、右肺动脉的各分支在肺实质内又反复分支,与支气管的分支伴行,最后达肺泡壁,形成稠密的毛细血管网。

肺动脉输送的是含二氧化碳较多的静脉血。在肺动脉干分叉处稍左侧与主动脉弓下缘之间有一结缔组织索,称动脉韧带。管径在0.3~1m m 之间,为小动脉(sm all-artery),小动脉包括粗细不等的几级分支,也属肌性动脉。较大的小动脉,内膜有明显的内弹性膜,中膜有几层平滑肌,外膜厚度与中膜相近,一般没有外弹性膜。口径在1m m 以下的动脉,管壁有完整的平滑肌层及少量的弹性纤维和胶质纤维。小动脉是决定周围循环阻力大小的主要因素,也是调节微循环灌注量的“总开关”。典型的小动脉,其管壁的厚度与管径相比约为1∶2。

中膜的肌层相对比其他动脉为厚,当平滑肌在神经支配下强力收缩时,其管腔可以完全闭塞,而使血液不能流入它所分布的毛细血管内,从而增加了周围血液循环的阻力。如果有许多小动脉同时收缩,可使血压显著上升。反之,当小动脉的平滑肌舒张时,则可使大量的血液流入毛细血管,外周阻力明显下降,血压降低。终末小动脉(terminalarteri-ole)的口径为20~30μm ;后小动脉(m etar-teriole),又称毛细血管前小动脉(p recapil-lary arte riole)的口径为12~15μm 。管壁内均有较稀疏的平滑肌,在毛细血管前小动脉分支的起始部分,管壁平滑肌成分增厚,叫做毛细血管前括约肌(precapillary sphin c-ter),其收缩或舒张,可调节真毛细血管的血流量,是调节微循环灌注量的“分开关”。

支配小动脉平滑肌的交感神经纤维,可延伸到终末小动脉和后小动脉的平滑肌细胞。在毛细血管前括约肌上交感神经纤维特别丰富。肺小动脉内皮细胞呈单层多角形铺路石状分布,该细胞在维持血管内外的动态平衡、合成和分泌细胞因子和介质、维持凝血和纤溶的动态平衡中起重要作用。

方法简介
通蔚生物实验室分离的人肺小动脉内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×105cells/瓶。

质量检测
通蔚生物实验室分离的人肺小动脉内皮细胞经C D 31免疫荧光鉴定,纯度可达90% 以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
包被条件 : PLL(0.1m g/ml),明胶(0.1%)
培  养 基 : 含FBS、EG F、bFG F、IG F、V EG F、H eparin、H ydrocortisone、P enicil
lin、Streptom ycin等
换液频率 : 每2-3天换液一次
生长特性 : 贴壁
细胞形态 : 内皮细胞样 
传代特性 : 可传2-3代
传代比例 : 1:2
消  化 液 : 0.25% 胰蛋白酶
培养条件 : 气相:空气,95% ;C O2,5%
人肺小动脉内皮细胞体外培养周期有限;建议使用通蔚生物配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞培养状态
发货时发送细胞电子版照片

使用方法
人肺小动脉内皮细胞是一种贴壁细胞,细胞形态呈内皮细胞样,在通蔚生物技术部标准操作流程下,细胞可传2-3代;建议您收到细胞后尽快进行相关实验。
客户收到细胞后,请按照以下方法进行操作。
1.取出T 25细胞培养瓶,用75% 酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5% C O 2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h,以稳定细胞状态。
2.贴壁细胞消化
1) 吸出T25细胞培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次。
2) 添加0.25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培养瓶中,轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃温浴1-3min;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后,再加入5ml完全培养基终止消化。
3) 用吸管轻轻吹打混匀,按传代比例接种T25培养瓶传代,然后补充新鲜的完全培养基至5m L,置于37℃、5% C O 2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养。
4) 待细胞完全贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
3. 复苏操作说明
1. 准备好37度水浴锅,预热至37度。
2. 准备好T25培养瓶,加入10ml完全培养基(培养基量必须大于冻存液10倍体积)。
3. 取出干冰内冻存细胞管,用EP手套包裹冻存管(防止管内进水导致污染),迅速放于水浴锅内,于1min内融化完全。
4. 取出冻存管,酒精喷洒消毒后擦干,置于超净台内。
5. 吸取冻存管内细胞悬液,加入步骤2中准备好的T25培养瓶内,8字缓慢摇匀。
6. 培养瓶放于37度C O 2恒温培养箱内,静置培养24h,更换新鲜换培养基(注意贴壁细胞、悬浮细胞不同换液操作方法)。
4.细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性,贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿(如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等)时,需要对实验器皿进行包被,以增强细胞贴壁性,避免细胞因没贴好影响实验;包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚赖氨酸PLL(0.1m g/m l),明胶(0.1% ),依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。

注意事项
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2. 在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作。
3. 传代培养过程中,胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和通蔚生物技术部沟通。由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,详尽告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。