欢迎来到上海通蔚！
请登录 ▏ 注册 ▏ 购物车 ▏ 帮助

021-54845833/15800441009

品质保证 · 通蔚试剂

当前位置: 首页 > 科研产品 > ELISA试剂盒 > 大鼠 Elisa试剂盒 > 大鼠对氧磷酶1(PON1)ELISA试剂盒

产品中心

最新产品

  • 大鼠 Elisa试剂盒

    大鼠对氧磷酶1(PON1)ELISA试剂盒

    规格：
    价格：￥
    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目录号 : TW2101
    • 应用 : 仅限于科研使用
    • 英文名 ：Rat PON1 ELISA KIT
    • 货期 : 现货
    • 灵敏度 ：0.08ng/mL
    • 规格 ：48T/96T
    • 检测范围 ：0.157 ~ 10ng/mL
  • 商品详情
  • 参考文献
  • 说明书下载
  • 商品评论0
  • 相关产品
简介
对氧磷酶1（PON1）也被称为A酯酶、高半胱氨酸硫酸盐酶或血清芳基磷酸酶1，是一种在人类中由PON1基因编码的酶，PON1是一个多基因家族中第一个被发现的成员，该家族还包括PON2和PON3，它们的基因在7号染色体上彼此相邻，人类PON1是一种由354个氨基酸组成的糖蛋白，分子量为43000道尔顿，在循环中与高密度脂蛋白结合，X-射线晶体学显示PON1的结构是一个6叶螺旋桨，有一个独特的盖子结构覆盖活性部位通道，允许与HDL结合，PON1负责水解有机磷农药和神经毒气，其基因的多态性显著影响该酶的催化能力。
检测原理
本试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术:将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及标准品中的待测物PON1，清洗后，再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗，形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物，随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育，待孵育结束后清洗，接着加入TMB显色后，若样本中有待测物则显蓝色，加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去，用酶标仪在450 nm处测OD值，颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比，通过绘制标准曲线计算出样本中PON1的浓度。
需要的其他材料
1.  酶标仪，包含450nm测定波长，同时包含600-680nm校正波长更佳；
2.  移液器及枪头；
3.  蒸馏水或去离子水；
4.  100-1000 mL刻度量筒；
5.  洗瓶、排枪或自动微孔板清洗机；
6.  水平轨道微孔板振荡器，能够保持500±50 rpm的速度；
7.  用于稀释标准品和样品的试管。
样品保存
样品收集后若在 1 周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃（1个月内检测），或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融，标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
试剂准备工作
使用前将所有试剂置于室温平衡30分钟左右。

洗涤液/稀释液配置

如果洗涤液/稀释液（20×）有晶体析出，需在37℃下加热⾄晶体全部溶解。用蒸馏水1:20稀释（例如：1mL 浓缩洗涤液加入19mL的蒸馏水）

标准品配置
试剂盒中取出标准品，准备7个试管，先从200ng/mL标准品（200μL）按需吸取一定量用1×稀释液稀释至10ng/mL（例：50μL的标准品母液+950μL的1×稀释液，制备得到1000μL的10ng/mL浓度标准品），随后在6个试管中分别加入500μL的1×稀释液，在这6个单独的试管中将10ng/mL标准品依次2倍倍比稀释至6个梯度，共配制7个浓度的标准品，依次为: 10ng/mL、 5ng/mL、 2.5ng/mL、 1.25ng/mL、 0.625ng/mL、 0.313ng/mL、 0.157ng/mL，从最高浓度标准品溶液中吸取500μL标准品到下一个试管中，轻轻吹打混匀，以此类推进行标准品的倍比稀释（如图所示），1×稀释液用作零浓度标准品(0ng/mL)。

大鼠(PON1)ELISA试剂盒
抗体工作液配置
使用前10分钟，将100×生物素化抗体于1000×g离心1分钟，随后用1×稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×生物素化抗体工作液，根据所需用量当日配置当日使用。
酶结合物工作液配置
使用前10分钟，将100×SA-HRP溶液于1000×g离心1分钟，随后用1×稀释液将100×SA-HRP稀释成1×SA-HRP工作液，根据所需用量配置。
备 注：如待测样本中PON1浓度高于标准品最高值，请根据实际情况选择适当的稀释倍数。
结果的计算
计算标准品和样本复孔的平均OD值并减去空白孔的OD值作为校正值。以浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出四参数逻辑函数的标准曲线(作图时去掉空白组的值)。或者使用能够生成四参数逻辑（4-P）曲线拟合的计算机软件来创建标准曲线。
若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测并在计算样本浓度时乘以相应的稀释倍数。
示例数据

以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。

标准品浓度(ng/mL)

10

5

2.5

1.25

0.625

0.313

0.157

0

OD值

2.567

1.73

0.963

0.768

0.398

0.212

0.125

0.067

校正OD值

2.500

1.663

0.896

0.701

0.331

0.145

0.058

0


下图所示标准曲线仅供示例，结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果

大鼠(PON1)ELISA试剂盒

重复性
板内变异系数小于10%，板间变异系数小于10%。
灵敏度
经样本测试，本试剂盒的检测灵敏度为0.08ng/mL。
特异性
该试剂盒测定可识别重组大鼠PON1。
其他相关蛋白在稀释缓冲液中制备为50ng/mL，并测定交叉反应性。没有观察到明显的交叉反应。