【通蔚生物】：我们做ELISA试剂盒实验需要注意事项

      我们平时在ELISA试剂盒实验的时候总是会出现一些误差，那么在ELISA试剂盒实验前我们该如何避免这些误区呢？在ELISA试剂盒实验前我们又有哪些需要注意事项呢？
  1、仔细阅读说明书；
  2、确定ELISA试剂盒在有效期内；
  3、按说明书确定所有试剂齐全（数量、体积）；
  4、标本制备要规范，每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备（贮存），尽量分装做备份。短期内无法实验者，注意低温保存；
  5、准备好所有实验额外所需物品，如试管、吸头、移液器、离心机等；
  6、根据检测标本数量确定所需试剂的量；
  7、按说明书将所用试剂平衡至室温，配制所需试剂。
ELISA试剂盒试验时，
1.正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
2.在ELISA试剂盒实验中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括：
  （1）固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。
  （2）包被抗体（或抗原）的选择：将抗体（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18～24小时。蛋白质包被的浓度需进行滴定：ELISA试剂盒即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg／ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值大而蛋白量少的浓度。