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021-54845833/15800441009
KCL-22人慢性粒细胞白血病细胞
细胞特性
1) 来源：粒性白血病
2) 形态：圆形，悬浮生长
3) 含量：>lxl06 个/mL
4) 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5) 规格：T25瓶或者 lmL 冻存管包装
运输和保存：使用含有优质胎牛血清的 2ml 冻存管发送存活细胞。收到细胞后， 可在1000RPM，常温条件下，离心 5min 后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐 使用的培养基后转移至 l〇cm 培养皿或者 T25培养瓶中培养，传代达到细胞生长 状态良好时，再 进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供科研使用。
细胞培养步骤
1) 培养基及培养冻存条件准备：
1. 准备 RPIVM-1640 培养基(RPIVM-1640:GIBCO,货号 31800022,添加 NaHC031.5g八, D-葡萄糖 2.5g 八，丙酮酸钠 O.llg 八)，90%;优质胎牛血清，10%。
2. 培养条件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3. 冻存液：90%完全培养基，10%DMSO,现用现配。液氮储存。
2) 细胞处理：
复苏细胞：将含有 lmL 细胞悬液的冻存管在 37°C 水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4分钟，弃去上清液，补 加 l-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将 细胞悬液加入 l〇cm皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法： 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2次。力口 2m 丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于 37°C 培养箱中消化 1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4分 钟，弃去上清液，补加 l-2mL 培养液后吹匀。将细胞悬液按 1: 2到 1: 5的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心 5分钟，弃去上清液，补加 l-2mL 培养液后吹句，将细胞悬液按 1: 2到 1: 5的比例分到新的含 8ml 培 养基的 新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细 胞悬 液按 1: 2到 1: 3的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
KCL-22人慢性粒细胞白血病细胞
细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约 lml 含血清的培养基后 加入冻存管中，再添加 1〇%DMSO 后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞 收集，1000RPM，常温条件下离心 5分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走）， 加入部分新鲜培养基，吹打均匀后，加入到冻存管中，在冻存管中加入 10%DMSO 摇匀后进行冻存。
注意事项：
收到细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注 意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
